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低速離心機(jī)在提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白中的應(yīng)用

時間:2018-06-06 | 來源:四川蜀科儀器有限公司
  蜀科低速離心機(jī)操作簡單、運(yùn)行平衡、性能穩(wěn)定、安全可靠,入選國產(chǎn)好儀器”,在臨床醫(yī)學(xué),放射免疫、生物化學(xué)、食品衛(wèi)生、環(huán)保等科研領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。今天來介紹一下低速離心機(jī)在提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白中的應(yīng)用。
  提取細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白的操作步驟如下:
  1、決定細(xì)胞生長狀態(tài),細(xì)胞生長狀態(tài)應(yīng)該是80%或者更好:
  2、用蜀科離心機(jī)以1500r/min離心5min
  3、棄上清液,用等體積的冷PBS洗細(xì)胞,像步驟2那樣,反復(fù)3次
  4、根據(jù)估計的沉淀量加入5倍體積的isotonic lysis buffer到細(xì)胞顆粒中,使細(xì)胞溫和懸浮,盡量避免泡沫
  5、加入裂解液lysis buffer在懸浮的細(xì)胞中,并放在冰上15min讓細(xì)胞膨脹,可以通過顯微鏡檢查
  6、對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中膨脹的細(xì)胞,加入10%的IGEPAL CA-630使最后的濃度達(dá)到0、3%,混勻,加的時候要溫和
  7、立即用蜀科低速離心機(jī)離心(量大的可以用1、5ml的 EP管,以5500r/min離心30s;量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min)
  8、轉(zhuǎn)移上清液(細(xì)胞質(zhì)蛋白)到一個新的冷凍管中
  9、用懸浮顆粒5倍體積的isotonic lysis buffer懸浮細(xì)胞,并混勻。
  10、用離心機(jī)離心細(xì)胞懸浮液,以1500r/min離心5min,移掉上清液
  11、用2/3倍體積的extraction buffer懸浮顆粒
  12、把管子放置在震蕩混勻器上,以700r/min,15min震蕩混勻,接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細(xì),避免泡沫產(chǎn)生
  13、以9400r/min離心15min,低溫離心完后轉(zhuǎn)移上清液到一個新的冷凍離心管中
  14、分成幾份用液氮冷凍,并且保存起來(長期保存應(yīng)放在-80℃上,短期保存要放在-20℃上)。
  蜀科儀器專注于離心機(jī)的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售,產(chǎn)品遠(yuǎn)銷海內(nèi)外,
低速離心機(jī)各項指標(biāo)更是處于行業(yè)優(yōu)勢地位,還可提供定制服務(wù),歡迎來電咨詢。
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