行業(yè)動(dòng)態(tài)
低速離心機(jī)在中性粒細(xì)胞磁珠分選中的應(yīng)用
時(shí)間：2018-07-25
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來(lái)源：四川蜀科儀器有限公司
試劑耗材及設(shè)備：磁力分選器，磁柱，CD15磁珠試劑盒，磁珠分選緩沖液50ml，RP1640，1ml 槍及槍頭，20微升槍與槍頭，蜀科低速離心機(jī)，15ml離心管4支，細(xì)胞計(jì)數(shù)板。
步驟：
1. 制冰，保證磁力分選器可以放入冰盒內(nèi)操作，在4-8℃內(nèi)進(jìn)行分選；
2. 配液磁珠分選緩沖液（50ml PBS液中含2mmol/L EDTA，0.5%BSA，PH=7.2）；
3. 將上步初步分選的中性粒細(xì)胞懸液用蜀科低速離心機(jī)300g離心10分鐘，去上清；
4. 細(xì)胞重懸于磁珠分選緩沖液中，107細(xì)胞重懸于80微升緩沖液中；（如細(xì)胞數(shù)多按倍數(shù)增加）
5. 107細(xì)胞中加入20微升CD15磁珠；充分混勻放入2-8℃避光孵育15分鐘；
6. 用1-2ml緩沖液洗滌細(xì)胞/107細(xì)胞，再次用蜀科低速離心機(jī)300g離心10分鐘，去上清；
步驟：
1. 制冰，保證磁力分選器可以放入冰盒內(nèi)操作，在4-8℃內(nèi)進(jìn)行分選；
2. 配液磁珠分選緩沖液（50ml PBS液中含2mmol/L EDTA，0.5%BSA，PH=7.2）；
3. 將上步初步分選的中性粒細(xì)胞懸液用蜀科低速離心機(jī)300g離心10分鐘，去上清；
4. 細(xì)胞重懸于磁珠分選緩沖液中，107細(xì)胞重懸于80微升緩沖液中；（如細(xì)胞數(shù)多按倍數(shù)增加）
5. 107細(xì)胞中加入20微升CD15磁珠；充分混勻放入2-8℃避光孵育15分鐘；
6. 用1-2ml緩沖液洗滌細(xì)胞/107細(xì)胞，再次用蜀科低速離心機(jī)300g離心10分鐘，去上清；
7. 重懸細(xì)胞于緩沖液中，108細(xì)胞重懸于500微升緩沖液中；
8. 將磁力分選器置于冰盒中，用3ml緩沖液沖洗磁柱；
9. 將含有中性粒細(xì)胞的緩沖液加入磁柱中；
10. 用緩沖液沖洗磁柱，每次3ml，沖洗3次；
11. 除去磁場(chǎng)，把磁柱放置于15ml離心管上，用5ml緩沖液加壓快速?zèng)_洗磁柱；
12. 離心管中收集的便是中性粒細(xì)胞；
13. 最后用蜀科低速離心機(jī)300g離心去上清，重懸細(xì)胞于10ml細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞計(jì)數(shù)。
8. 將磁力分選器置于冰盒中，用3ml緩沖液沖洗磁柱；
9. 將含有中性粒細(xì)胞的緩沖液加入磁柱中；
10. 用緩沖液沖洗磁柱，每次3ml，沖洗3次；
11. 除去磁場(chǎng)，把磁柱放置于15ml離心管上，用5ml緩沖液加壓快速?zèng)_洗磁柱；
12. 離心管中收集的便是中性粒細(xì)胞；
13. 最后用蜀科低速離心機(jī)300g離心去上清，重懸細(xì)胞于10ml細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞計(jì)數(shù)。
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