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臺式低速冷凍離心機提取細胞質和細胞核蛋白離心詳細步驟
時間：2021-09-08
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來源：四川蜀科儀器有限公司
臺式低速冷凍離心機，轉速一般不超過4000r/min，最大容量為2~4L，是實驗室于大量初級分離提取生物大分子、沉淀物等。其轉頭多用鋁合金制的甩平式和角式兩種，離心管有硬質玻璃、聚乙烯硬塑料和不銹鋼管多種型號。離心機裝配有驅動電機、定時器、調整器（速度指示）和制冷系統(tǒng)（溫度可調范圍為-20~+40℃），可根據(jù)離心物質所需，更換不同容量和不同型號轉速的轉頭。
1.決定細胞生長狀態(tài)，細胞生長狀態(tài)應該是80%或者更好：
2.用離心機以1500r/min離心5min
3.棄上清液，用等體積的冷PBS洗細胞，像步驟2那樣，反復3次
4.根據(jù)估計的沉淀量加入5倍體積的isotoniclysisbuffer到細胞顆粒中，使細胞溫和懸浮，盡量避免泡沫
5.加入裂解液lysisbuffer在懸浮的細胞中，并放在冰上15min讓細胞膨脹，可以通過顯微鏡檢查
6.對于細胞實驗中膨脹的細胞，加入10%的IGEPALCA-630使最后的濃度達到0.3%，混勻，加的時候要溫和
7.立即離心（量大的可以用1.5ml的EP管，以5500r/min離心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min）
8.轉移上清液（細胞質蛋白）到一個新的冷凍管中
9.用懸浮顆粒5倍體積的isotoniclysisbuffer懸浮細胞，并混勻
10.用離心機離心細胞懸浮液，以1500r/min離心5min，移掉上清液
11.用2/3倍體積的extractionbuffer懸浮顆粒
12.把管子放置在震蕩混勻器上，以700r/min，15min震蕩混勻，接著以1400r/min,15min,整個過程要仔細，避免泡沫產(chǎn)生
13.以9400r/min離心15min，低溫離心完后轉移上清液到一個新的冷凍離心管中
14.分成幾份用液氮冷凍，并且保存起來（長期保存應放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）
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